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pbs缓冲液作用及成分（附pbs缓冲液适用范围）

龙九 • 2022年8月25日 pm6:28 • 历史

缓冲溶液种类繁多，常用于实验，从这一角度出发，小析姐将有关各类缓冲溶液的功能，缓冲范围，选用及计算以及使用注意事项等内容整理出来，以期大家能够对缓冲溶液有个完整的认识。

一、缓冲溶液有哪些？缓冲液（Buffer solution）一般指“弱酸及其共轭碱”或“弱碱及其共轭碱”缓冲液对合而成的溶液，它能在添加一定数量其它物质的情况下延缓pH变化。以生物实验使用频率最高的缓冲液PBS为例，其为Na2HPO4,KH2PO4构成的缓冲对,PH5.8～8.0区间内缓冲能力强。

缓冲的原理

缓冲溶液选取和计算

为确保缓冲溶液具有充分的缓冲能力，缓冲溶液制备过程中，必须：

为了使共轭酸碱对浓度比在1附近，在需保持pH范围内，要选择适当缓冲对使其弱酸PKa与规定pH相等或相近。

以生物培养液为例，需要用PH=7.0缓冲溶液进行缓冲，而H2PO4-pKa2-pKa3-pKa4-PKa2-PKa3-PKa7-PKa6-pKa7-pKa1-pKa6-PKa4-pKa-pKa8-pKa9-PKa1-PKa8-PKa9-pKa10-PKa10-pKa5-PKa5-pKa0-PKa0-pKa12-PKa-PKa11-PKa12-pKa20-Pa7-PH2PO42-为已知为可供选择适当缓冲对缓冲。如若制备PH等于9.0缓冲溶液时，可以选用NH3·H2O-NH4Cl缓冲对（pKa（NH4-）=9.25）。由此可见，弱酸中Ka在缓冲溶液选择中占主要地位，表1中列举了一些常见缓冲溶液。

共同的成分

通常用作缓冲溶液，酸类是弱酸与其共轭酸盐结合而成，起缓冲作用。常用缓冲体系如下：

1.弱酸及其盐类（例如HAc，NaAc等）

2.弱碱及其盐类（NH3.H2O-NH4Cl）

3.多元弱酸酸式盐和相应次级盐（例如，NaH2PO4）水溶液成分。

但生化实验室通常使用的缓冲系包括磷酸，柠檬酸，碳酸，醋酸，巴比妥酸, Tris（三羟甲基氨基甲烷）等体系，在生化实验或者研究工作中，缓冲体系应谨慎选择，这是因为有时对实验结果起作用的不是缓冲液pH值的大小，而是缓冲液内某一种离子的含量。例如硼酸盐，柠檬酸盐，磷酸盐，三羟甲基甲烷（THM甲烷）等缓冲剂会发生不必要的化学反应。

硼酸盐：硼酸盐和多种化合物生成复盐，例如蔗糖。

柠檬酸盐：柠檬酸盐离子易和钙相结合，因此当有钙离子时就无法使用了。

磷酸盐：在某些试验中，作为酶的抑止剂，甚至作为一种代谢物，重金属很容易以磷酸盐形态析出溶液。且其在pH7.5或更高的条件下，缓冲能力非常小。

三羟甲基氨基甲烷（THMDA）：能与重金属共同发挥作用，但是在某些体系中还起到抑制作用。它存在的主要弊端时温度的影响。这一点常常被人们所忽视，室温pH为7.8 Tris缓冲液中，4°C为8.4, 37°C为7.4，所以4°C制备的缓冲液经37°C测定后氢离子浓度提高十倍。当pH7.5时，它的缓冲能力很不够理想。

缓冲溶液对其影响

缓冲溶液的功能是调节溶液pH值，使其酸度达到分析方法限定的限度，如在碱性介质和铁氰化钾作用下苯酚能与4-氨基安替比林发生化学反应，得到橙红色安替比林染料（安替比林）.为防止芳香胺类干扰, pH为10士分0.2为最佳。要做到这一点，必须向待测溶液中加氨一氯化钱缓冲溶液，并调节控制待测溶液p H10 .0士分0.2。

在实践中有的分析人员因对缓冲溶液的机理不甚了解，当配制及所用缓冲溶液达不到指定值时，为了使缓冲溶液符合要求，便采用强酸，强碱（如盐酸或氢氧化钠）来调整缓冲溶液，认为这可使缓冲溶液以最快速度到达所需的pH值，但结果事与愿违，这类溶液pH值虽调得合适，但其缓冲体系遭到破坏，功能丧失，缓冲溶液通常是弱酸与其弱碱或弱酸盐与其弱碱盐的共轭体对。

使用注意事项

使用缓冲溶液注意事项：许多缓冲溶液含易挥发组分，例如，氨-氯化铵氨酷酸醋酸钠醋酸等。现许多实验室都引进定量加液器（简称加液器），采用定量加液器进行加液，有操作简单、精确、误差恒定等优点，尤其在制成成批样品方面更能显示其优越性，许多同志还喜欢采用这种加液器进行缓冲液的添加，但要注意缓冲液在定量加液器内不可久存，因为这种器皿未封闭，容易使氨挥发(醋酸-醋酸钠缓冲液与醋酸同理)，这样，会使溶液产生故障，正确方法是缓冲液要适量制备，用完后要及时封闭，放在低温条件下贮存。

提及缓冲液必须引申出Henderson-Hasselbalch方程。

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